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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專用于定量檢測大鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的細(xì)胞周期素 D3 濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于細(xì)胞周期 G1/S 期調(diào)控、細(xì)胞增殖、腫瘤發(fā)生及細(xì)胞周期紊亂研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗大鼠 Cyclin-D3 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Cyclin-D3 被固相抗體捕獲。

檢測：加入化的抗大鼠 Cyclin-D3 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類型與處理

血清：無熱源無菌采血管采集，杜絕溶血、脂血污染；1000×g 離心 10 min 分離上清，-20℃分裝保存，嚴(yán)禁反復(fù)凍融。血漿：選用 EDTA / 檸檬酸鹽 / 肝素抗凝管采血混勻，離心去除血細(xì)胞取上清備用（部分試劑盒慎用肝素）。細(xì)胞上清：收集后 1000×g 離心 10 min 去除細(xì)胞碎片與雜質(zhì)，-70~-80℃低溫保存。組織勻漿：預(yù)冷生理鹽水 / PBS 冰上制備勻漿，高速離心取澄清上清，-20℃避光分裝貯存。

2. 通用注意事項

1) 樣本嚴(yán)禁添加疊氮鈉（NaN?），會抑制 HRP 酶活性，導(dǎo)致顯色失效。

2) 所有樣本避免室溫久置，全程低溫操作，防止蛋白降解。

3) 溶血、渾濁、微生物污染樣本直接廢棄，干擾抗體抗原結(jié)合。

4) 細(xì)胞上清、低豐度指標(biāo)樣本務(wù)必設(shè)置復(fù)孔，校正實驗誤差。

5) 檢測濃度超標(biāo)時，僅用試劑盒配套稀釋液稀釋，匹配基質(zhì)體系。

操作步驟：

1.試劑準(zhǔn)備

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃），濃縮洗滌液按 1:20 稀釋備用。

標(biāo)準(zhǔn)品按說明書進(jìn)行梯度稀釋，配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。

2.實驗流程

加樣：設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔，空白孔僅加稀釋液，其余孔分別加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品，37℃孵育。

加酶標(biāo)抗體：除空白孔外，每孔加入酶標(biāo)抗體，輕輕混勻，37℃避光孵育。

洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后甩干，重復(fù)洗滌 4-5 次，最后拍干殘留液體。

顯色：每孔加入 TMB 顯色液，37℃避光孵育，孔內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色。

終止：每孔加入終止液，混勻后顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。

檢測：在 450nm 波長下測定各孔 OD 值，15 分鐘內(nèi)完成讀數(shù)。

3.關(guān)鍵提示

實驗全程嚴(yán)格控溫，孵育時使用封板膜避免蒸發(fā)。

洗滌需充分，否則易造成高背景、結(jié)果偏差。

顯色液需避光，終止順序與加樣順序保持一致，確保充分混勻。

公司正在出售的產(chǎn)品：