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本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA），專(zhuān)用于定量檢測(cè)小鼠血清、血漿、組織勻漿及細(xì)胞上清液中的 BH3 結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白（Bid）濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL，靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL，適用于線粒體凋亡通路、死亡受體信號(hào)及細(xì)胞凋亡研究等領(lǐng)域。

核心原理：

固相化：微孔板預(yù)先包被抗小鼠 Bid 抗體。

結(jié)合：加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本，Bid 被固相抗體捕獲。

檢測(cè)：加入化的抗小鼠 Bid 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素，形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。

顯色：加入 TMB 底物，被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。

測(cè)定：用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值)，濃度與 OD 值成正比。

樣本要求：

1. 樣本類(lèi)型與處理

?血清?：使用無(wú)熱原/內(nèi)毒素試管采集，避免溶血或脂血。1000×g離心10分鐘分離血清，-20℃保存，避免反復(fù)凍融。

?血漿?：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，離心后取上清。

?細(xì)胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒，-70℃保存。

?組織勻漿?：生理鹽水勻漿后離心取上清，-20℃保存。

2. 注意事項(xiàng)

樣本中禁止添加NaN3，以免抑制HRP活性。

細(xì)胞培養(yǎng)上清可能因細(xì)胞狀態(tài)等因素導(dǎo)致檢測(cè)波動(dòng)，建議設(shè)復(fù)孔。

操作步驟：

1.試劑平衡試劑盒室溫平衡 30 min；濃縮洗滌液按說(shuō)明書(shū)稀釋混勻。

2.設(shè)孔加樣設(shè)空白、標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣品孔，精準(zhǔn)加樣，封板。

3.溫育結(jié)合37℃孵育 30–60 min，棄液拍干。

4.洗板加滿(mǎn)洗滌液浸泡，甩干拍干，重復(fù)3–5 次。

5.加酶結(jié)合物除空白孔外每孔加 HRP 標(biāo)記液，封板 37℃孵育。

6.再次洗板充分洗凈未結(jié)合游離酶，控干殘留液體。

7.顯色避光加顯色液 A/B，避光 37℃顯色 10–15 min。

8.終止讀數(shù)加終止液變色穩(wěn)定后，立刻酶標(biāo)儀讀 OD 值。

9.結(jié)果計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，換算樣本濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：