產(chǎn)品簡介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測大鼠血清、血漿、上皮細胞上清液中的角化細胞生長因子(KGF)蛋白濃度。檢測范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達 0.16 ng/mL,適用于上皮細胞增殖、皮膚損傷修復及黏膜保護研究等領域。
產(chǎn)品名稱:大鼠角化細胞生長因子(KGF)elisa試劑盒
英文名稱:KGF ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號:CS-5767E
檢測原理:

大鼠角化細胞生長因子 (KGF) ELISA 試劑盒的原理是?雙抗體夾心法?,通過固相載體捕獲抗原,再用酶標記的檢測抗體進行識別,最后通過底物顯色反應來定量檢測。
?固相化?:微孔板預先包被抗大鼠 KGF 抗體。
?結(jié)合?:加入標準品或樣本,KGF 被固相抗體捕獲。
?檢測?:加入生物su化的抗大鼠 KGF 抗體和 HRP 標記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標抗體" 復合物。
?顯色?:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍色變?yōu)辄S色。
?測定?:用酶標儀在 450nm 波長測定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實驗步驟?:

?試劑準備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標準品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標準品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復5次。
?加檢測抗體?:每孔加入100μL檢測抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍變黃)。
?檢測?:450nm波長測定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

?1.加樣孵育
每孔精準加入 100μL 對應標準品 / 待測樣本,空白孔加等量樣本稀釋液;貼封板膜密封微孔板,置于 37℃恒溫孵育箱,避光孵育 90min,保證抗原抗體充分結(jié)合。
2.洗板
輕柔棄去孔內(nèi)液體,吸水紙上快速拍干;每孔加滿洗滌工作液,靜置浸泡 30s,甩干拍凈;重復洗滌5 次,去除未結(jié)合雜質(zhì),降低背景值。
3.加酶結(jié)合物孵育
除空白孔外,每孔加入 100μL HRP 標記特異性檢測抗體;輕微水平晃板混勻,重新封板,37℃避光恒溫孵育 60min。
4.二次洗板
重復上述洗板操作 5 次,嚴格拍干孔內(nèi)殘留液體,杜絕殘留洗液造成假陽性、數(shù)據(jù)偏差。
5.底物顯色
避光條件下,每孔加入 90μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻;37℃避光精準孵育 10~15min,此時液體逐步顯現(xiàn)藍色,顯色深淺與待測物含量正相關。
6.反應終止
嚴格遵循加樣順序,每孔快速加入 50μL 酸性終止液,輕晃微孔板充分混勻,藍色即刻轉(zhuǎn)為黃色,終止酶促顯色反應。
7.上機讀數(shù)檢測
加終止液后15min 內(nèi),用酶標儀測定各孔 450nm 波長吸光度(OD 值);以標準品濃度為橫坐標、OD 值為縱坐標繪制標準曲線,擬合方程計算待測樣本目標蛋白濃度。
