產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),專用于定量檢測(cè)大鼠腦組織勻漿、細(xì)胞膜提取物中的 γ- 氨基丁酸受體亞基 α1(GABRA1)蛋白濃度。檢測(cè)范圍覆蓋 0.313-20 ng/mL,靈敏度達(dá) 0.16 ng/mL,適用于抑制性神經(jīng)傳導(dǎo)、癲癇、焦慮癥及神經(jīng)退行性疾病研究等領(lǐng)域。
產(chǎn)品名稱:大鼠γ-氨基丁酸受體亞基α1elisa試劑盒
英文名稱:GABRA1 ELISA Kit
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品貨號(hào):CS-6112E
檢測(cè)原理:


大鼠 γ- 氨基丁酸受體亞基 α1 (GABRA1) ELISA 試劑盒的原理是雙抗體夾心法,通過(guò)固相載體捕獲抗原,再用酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體進(jìn)行識(shí)別,最后通過(guò)底物顯色反應(yīng)來(lái)定量檢測(cè)。
固相化:微孔板預(yù)先包被抗大鼠 GABRA1 抗體。
結(jié)合:加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,GABRA1 被固相抗體捕獲。
檢測(cè):加入生物su化的抗大鼠 GABRA1 抗體和 HRP 標(biāo)記的親和素,形成 "抗體 - 抗原 - 酶標(biāo)抗體" 復(fù)合物。
顯色:加入 TMB 底物,被 HRP 催化后由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
測(cè)定:用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)定吸光度 (OD 值),濃度與 OD 值成正比。
實(shí)驗(yàn)步驟?:

?試劑準(zhǔn)備?:將試劑盒平衡至室溫(20-25℃),洗滌緩沖液按1:19稀釋。標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋至所需濃度。
?加樣?:每孔加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品或樣本,37℃孵育90分鐘。
?洗滌?:棄去液體,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后甩干,重復(fù)5次。
?加檢測(cè)抗體?:每孔加入100μL檢測(cè)抗體-HRP,37℃孵育60分鐘。
?洗滌?:同步驟3。
?顯色?:每孔加入90μL TMB底物A+B混合液,37℃避光孵育15分鐘。
?終止?:每孔加入50μL終止液,立即搖勻(顏色由藍(lán)變黃)。
?檢測(cè)?:450nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度(OD值),15分鐘內(nèi)完成。
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操作步驟?:

1. 試劑準(zhǔn)備
將試劑盒所有組分平衡至室溫(20–25℃,≥30min);濃縮洗滌液按 1:19 稀釋配制工作液。
標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶,梯度稀釋,配置系列濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)溶液,備用。
2. 實(shí)驗(yàn)流程
加樣:設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、樣本孔,每孔加入 100 μL 對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品 / 待測(cè)樣本,封板,37℃恒溫孵育 90 min。
洗滌:棄凈孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌工作液,靜置 30 s,甩干拍凈,重復(fù)洗滌 5 次。
加酶結(jié)合物:每孔加入 100 μL HRP 標(biāo)記檢測(cè)抗體,封板混勻,37℃孵育 60 min。
洗滌:重復(fù)上述洗滌步驟 5 次,拍干微孔。
顯色:每孔避光加入 90 μL TMB 底物顯色液,輕柔混勻,37℃避光顯色 15 min。
終止:按同等順序每孔快速加入 50 μL 終止液,輕晃混勻,溶液由藍(lán)轉(zhuǎn)黃。
讀數(shù):15 min 內(nèi),酶標(biāo)儀 450 nm 波長(zhǎng)測(cè)定各孔 OD 值,擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本含量。
3. 關(guān)鍵質(zhì)控要點(diǎn)
全程孵育使用專用封板膜,防止液體蒸發(fā)、交叉污染。
洗滌充分為實(shí)驗(yàn)核心,殘留洗液易造成背景偏高、假陽(yáng)性。
TMB 顯色液避光儲(chǔ)存,現(xiàn)用現(xiàn)加,嚴(yán)禁接觸氧化劑。
加終止液順序需與顯色加樣一致,避免局部色差、綠色殘留。